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    • ①      温度処理(キンギョ:高温処理)

      1.        尿素を含む受精液を満たした恒温槽を40℃に保っておく。

      2.        紫外線精子、あるいは正常精子で媒精した卵を、受精液を満たしたシャーレにいれて受精する。

      3.        受精後、約5分置く。受精卵は、シャーレの底に粘着する。

      4.        受精卵が付いたシャーレの受精液を捨て、40℃の恒温槽に入れて11.5分浸漬する。

      5.        処理後、直ちに室温の受精液と交換する(第2成熟分裂阻害:雌性発生2倍体(紫外線精子で媒精した場合)あるいは3倍体の誘起(正常精子で媒精した場合)。


      ②      高圧処理(サケマス)

      1.        フレンチプレスを用意する。

      2.        紫外線精子、あるいは正常精子で媒精した卵を10の淡水で受精後、ザルに空けて余分な精子を取り除き、さらに10の淡水に浸しておく。

      3.        受精後、約10-20分置く。

      4.        フレンチプレスのセルの中に淡水を入れる。

      5.        セルの中に受精卵をいれ、上蓋をパッキンのところまではめる。

      6.        上蓋にロケットをはめ、さらにノブを軽く閉める。

      7.        上蓋を軽く押し、セルの中から空気を抜く。

      8.        ノブをしっかりとねじって閉める。

      9.        セルをフレンチプレス本体上に置く。

      10.     ジャッキを上げて、セルに圧力をかける。

      11.     700気圧まで上がってから、7分間処理する。

      12.     圧が下がったら、適宜ジャッキアップし圧力を700気圧に保つ。

      13.     7分直前になったら、ジャッキ用の鉄棒を抜く。

      14.     7分経ったら、減圧用のコックを左に回し、圧をゆっくりと抜く。この時、急激に圧力を下げると、卵が崩壊するので注意する。

      15.     処理後、直ちに室温の受精液と交換する(第2成熟分裂阻害:雌性発生2倍体(紫外線精子で媒精した場合)あるいは3倍体の誘起(正常精子で媒精した場合))。