(3) サケマス

* この実験は2名で行います

Ⅰ.採卵・受精

①    池に網を入れ親魚を捕獲し、親魚の雌雄を確認する。

②    メス親魚の体をタオルで拭き水分を拭う。

③    一人（利手に軍手をする）が♀の頭を、もう一人（利手でないほうに軍手をする）が尾を持ち、尾の側の人が腹を搾り、卵を丼の中にいれたザルに取る。（糞や小水、水を混ぜない）

④    卵をサケマス用リンゲル液で洗い、どんぶりに移す。さらに卵の表面までリンゲルを加える。

⑤    オス親魚を同じように２人で支え、腹を搾って精子をプラスチックコップへ入れる。（小水が混合しないように注意する）

⑥    適量の卵をザルに取り、リンゲルを切って他のどんぶりに移す。

⑦    どんぶりの未受精卵に精子をかけ、卵を良く混ぜた後、リンゲル液を少し加え（精子の付活）、更に河川水（あるいは井水）を丼の半分位まで加える。数分置く（受精）。

⑧    受精卵をざるにあけ、水を切る。もう一度、丼に河川水（あるいは井水）を入れ、受精卵を入れて洗う。何回か繰り返して精子が残らないようにする。

⑨    飼育培養する場合は、イソジン液で消毒した後、孵化槽へ移す。染色体操作を行う場合は、フレンチプレスのセル内に収容し、圧力処理を行う。

Ⅱ.サケマス卵の卵膜軟化

①   受精後、卵をザルに取り、ザルの下からキムタオルをあて水分を吸い取ってから、酸性リンゲル液（HClによりpH 1.8に調製）で満たした容器へ移す。15分間の酸性処理を開始。（受精後1
分以内に移し終える）

②   15分間の酸性処理を行う間に、0.2% パンクレアチン・リンゲル液のpHを（NaOH により）pH 11.5に調製する。

③   酸性処理を15分間行ったところで、酸性リンゲル液を捨て、リンゲル液（pH 無調製）によってすすぐ。続いて、塩基性リンゲル液（NaOH によりpH 11.5 に調製）によってすすぐ。

④   卵をザルに取り、ザルの下からキムタオルをあてて水分を吸い取ってから、0.2% パンクレアチン・リンゲル溶液（NaOH によりpH 11.5 に調製）で満たした容器へ移す。容器をインキュベータ（10℃～15℃に設定）内に静置する。

⑤   パンクレアチン溶液に受精卵を浸すことで、早くて7時間程度から卵膜の一部が溶け始める。卵膜の除去が確認された卵はすみやかにリンゲル液（pH無調製）中へ移す。