Perfilado de sección


    • ①       採卵日の前日の夕方に雌雄を用意する。

      ②       雄個体を採卵用の水槽に2−3尾移す。雌雄は色調で区別(雄の方がオレンジがかっている)

      ③       採卵用の水槽の上にステンレス製のかごをのせる。かごの下部が水に浸っていることを確認。

      ④       雌の水槽から2個体雌を選んで、雄を入れた水槽の上のかごの中に入れる。

      ⑤       かごに水槽の蓋を乗せて、雌雄が飛び出ないようにする。

      ⑥       次の日の朝に、水槽の下の雄をネットで捕まえ、上のかごに移す。

      ⑦       雄が雌を追うかどうかを確認する。

      ⑧       追い始めたら間もなく産卵が確認される。(されない時もある)

      ⑨       20分程放置し、受精卵が水槽の底に溜まるのを待つ。

      ⑩       雌雄の入ったかごを、他の水槽の上に移す。

      ⑪       ホースのサイフォンとプラスチックシャーレ、茶こしを用意する。

      ⑫       ホースに水を入れ、水が出ないように片方の口を茶こしの中にいれ、茶こしはプラスチックシャーレの上に乗せる。

      ⑬       水槽の下に沈んだ卵を、ホースのサイフォンを使って、茶こしの中に回収する。

      ⑭       プラケースに飼育水を入れ、その中に茶こしに溜まった受精卵を入れる。

      ⑮       受精卵を口が大きなピペットを用いてガラスシャーレに移す。

      ⑯       大きなピペットを用いてガラスシャーレから水を取り除く。

      ⑰       受精卵の上から0.1%トリプシンリンゲル液(100ml120μℓ程の0.1N NaOH溶液を入れpHをアルカリ性にする)を入れて静置する。実体顕微鏡で卵膜が2枚にはがれてくるのを観察。

      ⑱       卵膜が剥けてきたら、大きなピペットで、卵を吸い込まないようにトリプシン溶液を動かし、卵膜と胚を分離する。泡立てないこと。泡立てると胚が泡と触れて爆発する。

      ⑲       シャーレを静かに動かして、卵膜除去卵を中央部に集める。

      ⑳       卵膜除去卵を一次培養液を満たしたアガロースシャーレに移す。