用語集
PMF（ピーエムエフ）：ペプチドマスフィンガープリンティング
真空乾燥：減圧した状態で乾燥すること
トリプシン：消化酵素の1種
intensity（インテンシティ）：強度
分解能：計測可能な最小値
質量スペクトル：イオン化した原子や分子の質量mと電荷zの比m/zにしたがって、その相対量を表やグラフの形で表したもの
プロトン：水素陽イオン
分子量：分子の相対的質量で単位はない、基準は原子量12の炭素原子
字幕
1
00:00:05,605 --> 00:00:06,973
今日行う実験は
2
00:00:06,973 --> 00:00:14,381
バンドがたくさん出てきましたが
そのバンドのタンパク質は何なのか ということです
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00:00:14,447 --> 00:00:18,51
質量分析によるタンパク質の同定と
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00:00:18,51 --> 00:00:19,886
一次構造の解析を行います
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00:00:19,886 --> 00:00:21,921
質量分析というのは
6
00:00:22,22 --> 00:00:24,724
分子量を求める実験手法です
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00:00:24,724 --> 00:00:29,129
非常に正確に
分子量を求めるには
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00:00:29,129 --> 00:00:30,830
タンパク質であれば
9
00:00:30,830 --> 00:00:34,401
10万とか14万とか
書いてありますが
10
00:00:34,401 --> 00:00:42,175
有効数字は1桁か2桁の
精度しかありません
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00:00:42,709 --> 00:00:45,578
そういう大雑把な分子量ではなく
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00:00:45,578 --> 00:00:49,883
分子量の一の位まで
正確に求められるような
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00:00:49,916 --> 00:00:52,152
そういう分析をします
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00:00:53,19 --> 00:00:56,723
それから とても少ない量の試料
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00:00:56,723 --> 00:01:02,462
電気泳動で バンドが かろうじて
見えるか見えないかくらいの少ない量でも
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00:01:02,462 --> 00:01:06,800
測定ができるという手法です
17
00:01:07,0 --> 00:01:08,802
それを利用して
18
00:01:08,802 --> 00:01:13,473
このバンドが
何というタンパク質なのかを
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00:01:13,473 --> 00:01:14,941
調べます
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00:01:14,941 --> 00:01:17,510
その中の 1つの方法として
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00:01:17,510 --> 00:01:20,947
PMF
(Peptide Mass Fingerprinting)
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00:01:20,947 --> 00:01:23,917
PMF解析の原理という図があります
23
00:01:23,917 --> 00:01:25,285
それを行います
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00:01:25,285 --> 00:01:30,290
(タンパク質をペプチドに消化して)
質量分析をします
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00:01:30,290 --> 00:01:33,760
図の横軸に「m/z」と
書いてあります
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00:01:33,760 --> 00:01:36,730
これは 基本的に
分子量に相当するものです
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00:01:36,730 --> 00:01:43,570
分子量に 水素イオン(プロトン)が
くっついたものの質量になります
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00:01:43,570 --> 00:01:48,41
だから 右のほうに行けば行くほど
分子量が大きいです
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00:01:48,41 --> 00:01:56,149
それから intensityと言いますが
これはペプチドが検出された強度です
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00:01:56,149 --> 00:02:00,86
棒のようなものが
一本一本立っていますが
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00:02:00,86 --> 00:02:04,190
拡大してみると
ピークになっていて
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00:02:04,190 --> 00:02:08,995
分子量の測定が
とても正確に行えて
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00:02:08,995 --> 00:02:10,897
分解能がとても高いので
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00:02:10,897 --> 00:02:14,100
針のような
細いピークになっています
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00:02:14,401 --> 00:02:16,36
そこに書いてあるように
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00:02:16,36 --> 00:02:20,507
大きな分子量のペプチドは
右のほうにピークを与えて
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00:02:20,507 --> 00:02:23,777
小さな分子量のペプチドは
左の方にピークを与える
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00:02:23,777 --> 00:02:26,513
それで こういうグラフができます
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00:02:26,513 --> 00:02:30,116
これを 質量スペクトルと呼びます
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00:02:30,116 --> 00:02:34,621
この質量スペクトルを
バンドそれぞれについて測るのを
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00:02:34,621 --> 00:02:36,222
明日の実験でやります
