用語集
running buffer（ランニングバッファー）：泳動用緩衝液
分子ふるい効果：分子の大きさによって電気泳動速度が異なること
字幕
1
00:00:09,242 --> 00:00:15,615
出来上がったゲルは
ガラス板ごと 泳動槽に取り付けて
2
00:00:15,615 --> 00:00:18,785
電気泳動を行います
3
00:00:18,785 --> 00:00:24,224
始めに サイドのクリップを外します
4
00:00:28,261 --> 00:00:34,200
シールを 外します
5
00:00:37,203 --> 00:00:45,445
ガラス板の切り欠きのある部分に
洗瓶の純水を少し吹きかけて
6
00:00:46,846 --> 00:00:56,856
滑りを良くしてから
コームを少しずつ引き抜きます
7
00:00:56,856 --> 00:01:06,866
コームを抜くときに
試料溝が乱れてしまうことがありますが
8
00:01:07,567 --> 00:01:13,373
後で整えることができますので
大きな問題にはなりません
9
00:01:13,373 --> 00:01:16,476
しかし ゆっくり引き抜いて
10
00:01:16,476 --> 00:01:24,484
試料溝の壁を引きちぎらないように
注意することが必要です
11
00:01:26,853 --> 00:01:30,724
泳動槽には
12
00:01:30,724 --> 00:01:38,231
下から3センチくらいまで
Running Buffer(泳動用緩衝液)を入れておきます
13
00:01:38,598 --> 00:01:43,269
この中に ゲルを浸しますが
14
00:01:43,303 --> 00:01:52,278
水色のフレームに
ゲルを作成したガラス板をはめ込みます
15
00:01:52,278 --> 00:01:59,686
切り欠きのあるガラス板が
内側になるようにはめ込んで
16
00:02:02,856 --> 00:02:11,765
中央のフレームに
カチッと取り付けます
17
00:02:14,901 --> 00:02:21,241
反対側にも 同じように
切り欠きのあるガラス板を内側にして
18
00:02:21,508 --> 00:02:26,312
ゲルを取り付けます
19
00:02:26,780 --> 00:02:31,217
フレームを泳動槽に入れると
20
00:02:32,252 --> 00:02:37,357
2枚のガラス板の間に
気泡が入ります
21
00:02:37,357 --> 00:02:43,863
この気泡は通電を妨げるので
必ず除去します
22
00:02:44,597 --> 00:02:46,633
泳動槽を傾けると
23
00:02:46,633 --> 00:02:54,774
気泡が斜め上方に移動して
抜けていきますので
24
00:02:55,408 --> 00:03:03,249
左右に傾けて
気泡を取り除いてください
25
00:03:04,117 --> 00:03:11,591
2枚のガラス板に挟まれた
上部電極層にも
26
00:03:11,591 --> 00:03:17,797
泳動用緩衝液を
たっぷり注ぎます
27
00:03:17,797 --> 00:03:20,433
次にサンプルをのせていきます
28
00:03:20,433 --> 00:03:24,104
2枚のガラス板の間の試料溝に
29
00:03:24,104 --> 00:03:30,110
マイクロシリンジや
先の細いピペットチップを使って
30
00:03:30,110 --> 00:03:33,446
試料を注入します
31
00:03:33,446 --> 00:03:39,452
チップやシリンジの針の先を
深いところまで刺し込み
32
00:03:39,452 --> 00:03:46,326
少し 試料を押し出します
33
00:03:46,326 --> 00:03:53,533
すると 試料が
試料溝の底に たまってきますので
34
00:03:53,533 --> 00:03:59,539
たまってきたら 針先やチップの先端を
上に引き上げます
35
00:04:00,440 --> 00:04:04,911
全ての試料溝に
試料を注入し終えたら
36
00:04:04,911 --> 00:04:14,154
カバーをかぶせて電源ケーブルを取り付け
通電します
37
00:04:14,154 --> 00:04:16,756
(40mA 定電流で泳動
約80分かかります）
38
00:04:17,524 --> 00:04:25,598
(4年生 実験補助）
泳動を開始すると
今の電流・時間・電圧が 確認できます
39
00:04:26,499 --> 00:04:28,401
通電が始まると
40
00:04:28,401 --> 00:04:32,605
青い ブロモフェノールブルー(BPB)は
41
00:04:32,639 --> 00:04:39,346
タンパク質よりも先に
下の方(+極)に 移動していきます
42
00:04:39,346 --> 00:04:42,349
ゲルの上方には
43
00:04:42,349 --> 00:04:44,718
濃縮ゲルがありますが
44
00:04:44,718 --> 00:04:49,656
濃縮ゲルでは
普通 タンパク質の分離は行われません
45
00:04:49,656 --> 00:04:51,24
縦方向に
46
00:04:51,91 --> 00:04:55,795
タンパク質が
広がって分布している状態なのですが
47
00:04:55,795 --> 00:05:00,967
濃縮ゲルは
これを圧縮する働きを持っています
48
00:05:00,967 --> 00:05:03,970
(通電開始から6分)
49
00:05:03,970 --> 00:05:06,973
(通電開始から10分)
50
00:05:06,973 --> 00:05:09,943
(通電開始から15分)
51
00:05:09,943 --> 00:05:14,147
(通電開始から22分)
縦方向に 細く圧縮された状態で
52
00:05:14,147 --> 00:05:17,83
分離ゲルに入っていく訳ですが
53
00:05:17,83 --> 00:05:21,521
分離ゲルの中では
分子ふるい効果により
54
00:05:21,521 --> 00:05:25,25
分子量の大小によって
タンパク質が分離されます
55
00:05:25,25 --> 00:05:28,862
圧縮されて
分離ゲルに突入することにより
56
00:05:28,862 --> 00:05:32,98
バンド(の発色)がシャープになる効果があります
57
00:05:32,98 --> 00:05:35,101
(通電開始から60分)
58
00:05:35,101 --> 00:05:38,905
(通電開始から84分) ブロモフェノールブルーが ゲルの下端から
59
00:05:38,905 --> 00:05:41,307
(通電開始から84分) 5mm くらいの所まで来たら
60
00:05:41,307 --> 00:05:43,977
泳動は 終了です
61
00:05:44,244 --> 00:05:48,515
泳動が終了したら
泳動槽を流しに持っていきます
62
00:05:49,249 --> 00:05:52,552
泳動用緩衝液を捨てて
63
00:05:52,552 --> 00:05:55,522
内側のカセットを取り出します
64
00:05:58,91 --> 00:06:06,266
フレームを取り外し
ガラス板を取り出します
65
00:06:06,933 --> 00:06:13,73
切り欠きのあるガラス板を
下にして持って
66
00:06:13,73 --> 00:06:20,947
2枚のガラス板の間に
定規や下敷きのようなものを差し込んで
67
00:06:20,947 --> 00:06:23,249
こじ開けます
68
00:06:24,851 --> 00:06:30,623
すると ゲルは
切り欠きのあるガラス板にくっついてきます
69
00:06:32,325 --> 00:06:37,130
次に ゲルとスペーサーの間に
70
00:06:39,666 --> 00:06:47,273
注射針を当てて
切り離します
71
00:06:51,778 --> 00:06:56,249
濃縮ゲルと分離ゲルの間に
境界線が見えますが
72
00:06:56,416 --> 00:07:02,756
ここも 注射針でなぞって
切り離します
73
00:07:16,136 --> 00:07:23,143
この段階で
洗瓶の純水を少量ゲルにかけます
74
00:07:23,576 --> 00:07:27,113
次に タッパーに染色液を用意します
75
00:07:30,50 --> 00:07:34,888
そして ガラス板から ゲルをはがしとります
76
00:07:36,56 --> 00:07:41,261
(はがし方は)
ゲルの下に指を少しずつ入れるようにします
77
00:07:41,394 --> 00:07:46,666
ゲルの端をつまんで持ち上げるのではなく
78
00:07:46,666 --> 00:07:52,972
複数の指を
ゲルの下に滑り込ませて
79
00:07:52,972 --> 00:07:56,710
広い面積を持って
引き上げるようにします
80
00:07:59,112 --> 00:08:02,849
これを染色液の中に入れます
81
00:08:05,352 --> 00:08:08,788
ゲルがよれたり
折れ曲がったりしていると
82
00:08:08,788 --> 00:08:11,291
染色のムラの原因になりますので
83
00:08:11,291 --> 00:08:15,495
(タッパーを)
揺すって広げてやります
84
00:08:15,495 --> 00:08:22,802
ときどき攪拌しながら
5分くらいつけておきます
85
00:08:23,103 --> 00:08:28,475
5分経ったら
ゲルを落とさないように注意しながら
86
00:08:28,475 --> 00:08:31,578
染色液を瓶に戻します
87
00:08:33,246 --> 00:08:38,752
そして ゲルを水道水で洗浄してください
88
00:08:38,752 --> 00:08:43,23
ゲル全体が
青く染まっています
89
00:08:43,89 --> 00:08:47,293
(青く染まった)ゲルを
さらに脱色液に浸して処理すると
90
00:08:47,293 --> 00:08:48,895
バンドが見えてきます
91
00:08:48,895 --> 00:08:52,565
脱色液をタッパーに入れて
92
00:08:52,565 --> 00:08:56,136
底に キムワイプを広げて入れます
93
00:08:58,38 --> 00:09:01,508
このキムワイプは
ゲルから抜け出してきた
94
00:09:01,508 --> 00:09:07,714
余計なCBB色素を
吸着する働きをします
95
00:09:09,516 --> 00:09:15,155
ここに 染色したゲルをのせます
96
00:09:17,924 --> 00:09:23,797
その上から さらに
もう1枚のキムワイプを 重ねて入れます
97
00:09:25,231 --> 00:09:31,37
このタッパーにラップをして(針などで穴を空け)
電子レンジで2分加熱してください
